流式細胞術的樣品制備方法

　　流式細胞術的測定對象是單細胞或單個微粒，在FCM技術中能夠制備出合格的單細胞懸液是非常重要的環(huán)節(jié)，單細胞懸液來自于動植物的不同組織器官，也可來自于非生物樣品，FCM中大多數為生物樣品，生物樣品主要來源于培養(yǎng)細胞、血液、新鮮實體組織以及石蠟包埋組織等，不同的組織有不同的單細胞分散方法，因此建立切實可行的FCM單細胞懸液的具體制備方法，在流式細胞分析中至關重要。那么你知道流式細胞術的樣品制備方法都有什么嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、酶消化法
 

　　酶的作用原理主要有三方面：一是破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等，二是水解組織細胞的緊密連接結構的蛋白質，三是水解組織間的粘多糖物質。酶消化法是實體組織分散為單細胞的主要方法之一。
 

　　二、機械法
 

　　機械法分散實體組織包括:用剪刀剪碎組織或用鋒利的解剖刀剁碎組織，用勻漿器勻漿，用細注射針頭反復抽吸細胞等，最后用300目尼龍網過濾細胞得到單細胞懸液。
 

　　三、化學處理法
 

　　化學處理法的主要原理是:將組織細胞間起粘連作用的鈣、鎂離子置換出來，從而使細胞分散下來。
 

　　四、注意事項：
 

　　1. 需要注意的是酶學方法的使用條件和影響因素(如酶濃度、酶效價、作用時間、pH值)等，例如胃蛋白酶在堿性環(huán)境下失去活性、胰酶在中性溶液中活性欠佳。
 

　　2. 采用網搓法同樣也可獲得大量細胞，但機械法容易造成細胞碎片和細胞團快，因此常與其他方法配合使用。
 

　　3. 新鮮組織標本應及時處理保存，避免細胞自溶導致DNA降解。
 

　　4. 根據實驗目的選擇最佳固定方式;如采用酶學法需注意酶的溶劑、消化時間、pH值、濃度等，同時根據組織成分合理選用酶類，例如含大量結締組織腫瘤，如食管癌、乳腺癌、皮膚癌等應選擇膠原酶。
 

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