Western blot的內(nèi)參該如何選擇

　　內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對于哺乳動物細胞來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白（Housekeeping Proteins），它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。那么你知道Western blot的內(nèi)參該如何選擇嗎？讓我們一起來看看吧！

　　為什么要使用內(nèi)參

　　Western blot除了能證明某樣品含有某種蛋白之外，其最為重要的作用是比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少。即為蛋白表達水平最直接的證據(jù)。要衡量蛋白的表達水平，前提條件就是等量的上樣量。然而如果僅將蛋白濃度測定作為規(guī)范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯1方法，顯然是不可取的。

　　在Western Blot中使用內(nèi)參其實就是在WB過程中另外用內(nèi)參對應(yīng)的抗體檢測內(nèi)參，這樣在檢測目的產(chǎn)物的同時可以檢測內(nèi)參的表達，由于內(nèi)參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結(jié)果才更為可信。此外使用內(nèi)參可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完q、整個Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

　　如何選擇內(nèi)參

　　一般來說，我們再選擇內(nèi)參時需要考慮以下幾個因素：

　　1、蛋白表達豐度：內(nèi)參應(yīng)該在樣本中穩(wěn)定表達，且表達量相對較高，這樣才能有效地檢測到內(nèi)參信號。

　　2、分子量：內(nèi)參的分子量應(yīng)該與目標(biāo)蛋白的分子量有明顯差異，以便在電泳分離時能夠分開。

　　3、細胞類型和組織特異性：根據(jù)你的實驗樣本類型，選擇適合的內(nèi)參。例如，β-actin常用于哺乳動物細胞，而Tubulin則更適合檢測細胞骨架蛋白。

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